•1940年荷蘭學者F.Zernik巧妙地應用光的衍射和干涉原理提高標本細節的折光率的差異,創造了相差顯微鏡(phase contrast microscope)。
從此非常簡便而有效地觀察體外培養細胞的生長過程,記錄細胞分裂周期中的染色體的移動。近年來細胞學家和生物學家所拍攝的生活細胞生長、分裂過程的非常出色的記錄影片,都是利用相差顯微鏡的優秀性能完成的。因此相差顯微鏡、倒置相差顯微鏡已成為細胞學、細菌學、寄生蟲學、免疫學和海洋生物學的實驗室儀器。
•相差顯微鏡是用于觀察組織培養中活細胞形態結構的。活細胞無色透明,一般顯微鏡下不易分辨細胞輪廓及其結構。
•相差顯微鏡的特點是將活細胞不同厚度及細胞內各種結構對光產生的不同折射作用,轉換為光密度差異(明暗差),使鏡下結構反差明顯,影像清楚。
相差顯微鏡的優點
•相差顯微鏡的關鍵性部件為位相板(phase plate)、環狀光闌(anular diaphragm)和中心調節望遠目鏡(centring telescope)。
環狀光闌
•環狀光闌是在玻璃片上噴涂金屬薄膜借以擋光,只留下環形透光窄縫的光闌。它能使來自反光鏡的直射光只能從環狀部分通過,形成一個空心圓筒狀的光柱,經聚光器并照射到標本以后,就產生兩部分光,一部分是直射光,另一部分是經過標本后產生的衍射光,這兩部分光經物鏡內相板的作用而改變了光的相位和振幅。
•在相差聚光器下面裝有一個轉盤,盤上鑲有寬狹不同的環狀光闌,在不同光闌邊上刻有10×、 20×,40×等字樣,這表示當用不同放大倍數的物鏡時,必須配合相應的環狀光闌相板
•相板安裝在物鏡的后焦平面上,帶有相板的物鏡稱為相差物鏡(蔡司廠用紅色“PH”表示)。
•相板上有一灰色的環狀圈,稱為共軛面。面上涂有吸光物質,直射光從這部分通過,并吸收了約80%的直射光,以降低它的透光度。在共軛面的內,外側部分稱為補償面,面上涂有減速速物質,使衍射光的相們發生改變,因此這兩者相結合就能分別改變直射光和衍射光的振幅和相位。
相板分類
•A型位相板 凡是共軛面即環形相板上涂有吸收層的相板均為A型。A型相板又分為二型:
•(1)A十型位相板:這是在共扼面上既涂吸收層又涂有電解質的相板。這種相板能吸收其共軛面的60一90%直射光,而透過其20一40%。市場出售的位相板型號分類時,都以數字表示其透射率和推遲位相的數據。
•(2)A一型位相板是共扼面上涂有吸收層。同時在補償面上涂有電解質。
•B型位相板凡是在補償面上涂有吸收層而在共軛面上有電解質的位相板,均屬此類。
•(1)B十型位相板是在補償面上涂有吸收層共軛面上有電解質的相板。
•(2)B一型位相板是在補償面上涂有吸收層加電解質的相板。
對焦望遠目鏡
對焦望遠目鏡(centring telescope)又叫合軸望遠鏡或校正望遠目鏡。這是一種場透鏡和接目透鏡之間的距離可變的目鏡。