本文介紹蛋白質濃度測定常見的另外一種方法，雙縮脲法，也稱Biuret法。
一、實驗原理
雙縮脲，也稱氨縮脲、縮二脲等，它是兩個分子脲（即尿酸）在180℃左右加熱條件下脫出一個氨后縮合形成的一種有機物，分子內含有兩個領接的肽鍵，其在堿性溶液中可與Cu2+發生絡合反應生成紫紅色絡合物，這種反應稱為雙縮脲反應。
蛋白質分子中含有大量彼此相連的肽鍵，同樣可以在堿性條件下與Cu2+發生雙縮脲反應生成紫紅色絡合物，溶液顏色的深淺與蛋白質濃度相關，與蛋白質分子量及氨基酸成分無關，且溶液在540nm處的吸光度值與蛋白質含量在一定范圍內具有良好的線性關系，因此可以利用此法測定蛋白質濃度。
二、試劑與器材
1、試劑：
1）標準蛋白溶液：可用牛血清白蛋白（BSA）作為標準蛋白，并用蒸餾水準確配制成10 mg/mL 濃度的標準溶液。
2）雙縮脲試劑：稱以1.50 g硫酸銅（CuSO4-5H2O）和6.0 g酒石酸鉀鈉（KNaC4H4O6-4H2O），用500 mL蒸餾水溶解，在攪拌下加入300 mL10% NaOH溶液，使得溶液呈堿性，之后再用水稀釋到1升，并貯存于塑料瓶中（或內壁涂以石蠟的瓶中）。可長期保存，但若干瓶中出現黑色沉淀則需要重新配制。
3）待測蛋白溶液：應適當進行稀釋，使得濃度在標準曲線范圍內。
2、器材：
分光光度計、恒溫水浴、移液器、渦旋混勻器、試管若干等。
三、操作方法
（1）移液。選取7支潔凈試管，其中5支標號1-5號管，其他2支分別標簽空白管和待測管。按照下表用移液器準確移取相應的標準蛋白溶液或待測樣品、蒸餾水和雙縮脲試劑于試管中。
（2）保溫。將上述各試管混勻后置于恒溫水浴鍋中37℃加熱20分鐘；
（3）測量吸光度。吸取各試管中的溶液于比色皿中并用分光光度計的540nm波長測定各吸光度值A540；
（4）制作標準曲線。以標準蛋白質濃度為橫坐標，吸光度值A540為縱坐標繪制標準曲線；
（5）計算。將測得的待測蛋白吸光度值代入標準曲線，就可計算得出蛋白質濃度。
四、方法優缺點
優點：
1、不同蛋白質產生顏色深淺相近，干擾物少；
2、測定時間較短（20-30分鐘），方法較為簡便快速
3、適用于需要快速但不需要很精確測定的蛋白質測定
缺點：
1、靈敏度較低，測定范圍為1-20mg蛋白質
2、干擾物質主要是硫酸銨、Tris緩沖液和某些氨基酸等
點成生物可提供多款高性能的恒溫水浴、移液器、渦旋混勻器等，滿足不同實驗需要。
