食物的蛋白質含量可通過多種方法確定,用于蛋白質分析的凱氏定氮法和氮燃燒法基于氮測定,這兩種方法都是用于食品營養標簽的目的,雖然凱氏定氮法已被廣泛使用了一百多年,但最近在許多情況下使用氮燃燒法方法的自動化儀器正在取代凱氏定氮法的使用。
凱式定氮儀程序測量樣品的氮含量,然后可以假設所分析的特定食物的蛋白質與氮的比率,來計算蛋白質含量,凱氏法程序基本上可分為三個部分消化,蒸餾,滴定。在消化步驟中,有機氮在催化劑存在下在約370攝氏度轉化為銨。在蒸餾步驟中,用NaOH將消化的樣品堿化,并以NH3蒸餾出氮氣。該NH3被捕獲在硼酸溶液中。通過用標準HCl溶液滴定,來量化該溶液中氨氮的量,通過分析進行試劑空白,并從每次測定中減去該空白所需的HCl滴定劑的體積。
一、消化
打開消化塊并加熱到適當的溫度,準確稱重約0.1克玉米粉,記錄重量,將玉米粉放入消化管中,重復兩個樣本。用玉米粉向每個管中加入一種催化劑片劑和適當體積的濃硫酸。樣品中使用的一個催化劑片劑+體積的硫酸+稱重紙。將消化管架放在消化塊上,蓋上消化塊,打開排氣系統,讓樣品消化直至消化完成,樣品應清晰,沒有燒焦的材料。從消化塊中取出樣品,并在排氣系統仍然打開的情況下冷卻。用適量的dd水小心稀釋消化液。旋轉每個管。
二、蒸餾
按照適當的程序啟動蒸餾系統,將適量的硼酸溶液分配到接收瓶中,將接收瓶放在蒸餾系統上,確保來自樣品蒸餾的管子浸沒在硼酸溶液中,將樣品管放置到位,確保其牢固就位,然后進行蒸餾直至完成,在該蒸餾過程中,將一定體積的NaOH溶液輸送到管中,蒸汽發生器將樣品蒸餾一段時間,完成一個樣品的蒸餾后,繼續使用新的樣品管并接收燒瓶,完成所有樣品的蒸餾后,按照制造商的說明關閉蒸餾裝置。
三、滴定
如果使用自動pH計滴定系統,按照制造商的說明校準儀器,將磁力攪拌棒放入接收瓶中,并將其放在攪拌盤上,滴定時保持溶液快速攪拌,但不要讓攪拌棒碰到電極,滴定每個樣品并空白至終點pH為4,記錄使用的HCl滴定劑的體積,如果使用比色終點,將磁力攪拌棒放入接收瓶中,將其置于攪拌板上,并在滴定時保持溶液劇烈攪拌,滴定每個樣品并用標準化的HCl溶液空白至個微弱的灰色。記錄使用的HCl滴定劑的體積。
文章來源:上海靳瀾儀器制造有限公司