PCR儀是用于擴增基因組DNA的常用科學工具,由于其特異性和敏感性,在實驗室中使用不同類型的PCR,用于定性和定量測試,PCR步驟涉及去成熟,退火和延伸,使用引物,Taq聚合酶和核苷酸。
1、巢式PCR
巢式PCR是聚合酶鏈反應的改進,旨在提高特異性,它減少了產品的非特異性結合,巢式PCR使用兩組引物。一種用于聚合酶鏈式反應的反應,第二次用于次反應的產物中以擴增目的。在巢式PCR的步中,通過使用組引物擴增靶DNA。步的產物通過第二組引物擴增。兩次設定的引物是步產物的互補。使用兩組PCR引物的目的是減少產物的污染并改善其特異性。
2、定量PCR
定量PCR也稱為實時PCR,是高度敏感和可重現的技術,該技術可以定量和半定量使用。這是PCR儀所涉及的基本原理,PCR儀是一種與PCR相關的儀器,有助于PCR反應,常用的檢測方法是使用DNA插入的熒光染料,這是一個實驗室過程。該過程包括定量擴增。定量PCR的優點包括快速檢測HCV,HBV等病毒感染
,高度敏感,可重復,減少污染,給定量結果,是軟件驅動的操作。
3、多重PCR
在PCR的單個步驟中擴增幾個基因組DNA序列,多個引物和DNA聚合酶與PCR儀一起使用,。該PCR用于在單一反應中檢測不同的病原體。對于多重PCR,引物的設計是不同的。為了擴增DNA模板的特定序列,單模板PCR使用具有多個正向和反向引物的單一模板。多模板PCR可以在單個反應中使用多個模板和幾個正向和反向引物。用于多重PCR設計的引物,長度約為18-22個堿基對。多重PCR的優點包括比其他PCR高效,擴增子提供內部控制,逆轉錄酶聚合酶鏈反應,逆轉錄酶PCR用于從RNA合成cDNA。
4、逆轉錄酶PCR原理
步使用逆轉錄酶從RNA形成cDNA,在下一步中使用PCR擴增cDNA。并且單鏈cDNA轉化為雙鏈DNA,整個過程的要點是mRNA的純化。在單步法中,cDNA的轉化和擴增在單個反應管中發生,并且在2步法中cDNA和擴增在不同的管中進行,2步法比單步法更方便。提取RNA,將提取的物質加入反應混合物中,如果存在靶標,引物用于使RNA鏈退火,逆轉錄酶將mRNA轉化為cDNA,引物延伸該鏈,溫度保持90度,降低溫度以使新形成的cDNA退火,新DNA由聚合酶合成,許多副本由多個循環形成。
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