一、把下面的物品,按流程加入微量離心管中
1.102-105份DNA模板
2.引物各1 umol/L
3.核苷酸200 umol / L
4.1/10體積的10*PCR緩沖液
5.DdH_2O補充到最終卷(最終卷50-100 ml)
混合后,將反應組分離心15秒,收集在試管底部。以上步驟僅用于實驗研究。目前商用試劑有dNTP、10倍PCR緩沖液、引物和ddH_2O混合,反應量為20-25 ugl。只要實驗者把加工好的樣品加進去就可以了。

在反應液表面加入50-100毫升石蠟油,防止蒸發。反應管在97℃變性10分鐘。
當溫度低至伸長時,加入1-5u Taq DNA聚合酶,離心30秒,使酶與反應溶液充分混合。試劑酶現在通常添加到反應溶液中供臨床使用。
四、PCR儀的循環程序為:94變性30秒,55退火20秒,72延伸30-35個循環。在zui的個循環結束后,將反應管在72℃下孵育5分鐘,以確保充分延長。
PCR儀也可用于擴增組織樣本中的DNA。
在PCR檢測RNA病毒時,首先要將RNA轉化為DNA進行擴增,因為PCR只能擴增DNA模板。我們將RNA的PCR反應稱為逆轉錄PCR,簡稱RT-PCR。把RNA轉化成DNA的過程叫做逆轉錄,這是通過逆轉錄酶的作用完成的。
PCR儀使用注意事項:
1. PCR儀應放置在一個堅實的水平臺上,外部電源系統電壓應匹配,并需要良好的接地線。
2. 環境溫度和濕度分別維持在23℃和60%左右。
3. 應配備功率大于3000W的穩壓器。
4. 定期清潔和保養。5. 使用時應嚴格遵守以上步驟。