分光光度計(jì)的工作原理與應(yīng)用范圍
分光光度計(jì)是理化分析中的儀器。它的基本原理是建立在光與物質(zhì)相互作用的基礎(chǔ)上，當(dāng)光子和某一溶液中吸收輻射的物質(zhì)分子相碰撞時(shí)，就發(fā)生吸收，測(cè)量其吸光度值的大小可反映某種物質(zhì)存在的量的多少。光的吸收程度與濃度有一定的比例關(guān)系，這就是的比直定律。該定律成立的必要條件是單色光（單一波長(zhǎng)光）照射樣品。為了使該定律具有良好的線性，對(duì)測(cè)量濃度有一定的范圍要求。也就是吸光度值控制在0.2～0.7之間，并且要求單色光垂直照射樣品，試樣要均勻。
一臺(tái)性能優(yōu)良的分光光度計(jì)，必須有一個(gè)高性能的光路系統(tǒng)即單色儀。單色儀有兩類：一類是以玻璃三棱鏡為色散元件組成；另一類是由光柵為色散元件組成。兩種單色儀各有利弊，用石英玻璃做成的單色儀，在紫外光區(qū)有較高的色散率，波長(zhǎng)精度較高，分辨率可達(dá)0.2nm，但在可見(jiàn)光區(qū)要大于2nm。近幾年出現(xiàn)了不少帶單片機(jī)的分光光度計(jì)，數(shù)據(jù)處理和操作功能大大加強(qiáng)，但基本原理沒(méi)有變。
另外，做好儀器的日常維護(hù)保養(yǎng)工作，也是用好一臺(tái)儀器的關(guān)鍵。分光光度計(jì)是一種高阻儀器，所以怕潮濕，過(guò)高的空氣濕度將影響儀器的穩(wěn)定性和電安全性，環(huán)境濕度一般控制在<85%。溫度對(duì)儀器也有一定影響，因儀器燈源本身具有熱量。當(dāng)工作一段時(shí)間后，儀器本身溫度會(huì)增加，當(dāng)環(huán)境溫度過(guò)高時(shí)會(huì)嚴(yán)重影響儀器讀數(shù)的穩(wěn)定性和使用壽命。實(shí)驗(yàn)室的溫度一般控制在10℃～25℃之間。在日常維護(hù)工作中要定期更換儀器的硅膠，定期開(kāi)機(jī)，這樣才能保證儀器的正常使用和測(cè)量數(shù)據(jù)穩(wěn)定可靠。
比色器的選用分光光度計(jì)的比色皿若選用不當(dāng)也會(huì)給分析工作帶來(lái)較大誤差。一般紫外光區(qū)用石英比色皿，可見(jiàn)光區(qū)用玻璃比色皿。石英比色皿可用在全波段，玻璃比色皿只能用于340nm以上波長(zhǎng)，因?yàn)椴ＡР煌缸贤夤狻Ｊ褂弥械谋壬髸?huì)受污染，其配套性會(huì)變差。所以當(dāng)發(fā)現(xiàn)配套性變差后要及時(shí)清洗，污染嚴(yán)重的要用重鉻酸鉀洗液清洗。當(dāng)兩個(gè)比色皿在檢定配套性時(shí)其透射比之差小于0.5%透過(guò)率時(shí)，就要考慮重新配套或更換比色皿。另外，每次裝入比色皿的溶液不要過(guò)滿，一般裝2/3即可，并在每次倒溶液時(shí)應(yīng)小心操作，減少對(duì)進(jìn)光面的擦洗次數(shù)，以防進(jìn)光面磨損而影響透過(guò)率。分光光度計(jì)是計(jì)量?jī)x器，必須定期檢定或校準(zhǔn)，若經(jīng)修理后必須重新檢定，經(jīng)檢定合格后方可使用。
純粹的單色光只是一種理想情況，分光光度計(jì)所能得到的“單色光”，實(shí)際上只是具有一定波長(zhǎng)范圍的譜帶，狹縫越寬，所包括的波長(zhǎng)范圍也愈寬。 對(duì)單色光純度來(lái)說(shuō)，狹縫是愈窄愈好，但光的強(qiáng)度也就越弱，因此狹縫不能無(wú)限制地小，狹縫的最小寬度取決于檢測(cè)器能準(zhǔn)確地進(jìn)行測(cè)量的最小光能量。目前達(dá)到的最小寬度為0.1nm。
分光光度計(jì)通常是由硒光電池或硅光電池和微安表組成，光電池是把紫外光能直接轉(zhuǎn)換成電能的光電元件。當(dāng)光線射到硒光電池表面時(shí)，入射光透過(guò)金屬薄膜到達(dá)半導(dǎo)體硒層和金屬薄膜的分界面上，在界面上產(chǎn)生光電效應(yīng)。產(chǎn)生的光生電流的大小與光電池受光表面上的照度有一定的比例關(guān)系。這時(shí)如果接上外電路，就會(huì)有電流通過(guò)，電流值從以毫瓦（mw）為刻度的微安表上指示出來(lái)。光電流的大小取決于入射光的強(qiáng)弱。
紫外的照度與人們的工作生產(chǎn)生活有著密切的關(guān)系。充足的光照，可防止人們免遭意外事故的發(fā)生。反之，過(guò)暗的光線可引起人體疲勞的程度遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)眼睛的本身。因此，不適或較差的照明條件是造成事故和疲勞的主要原因之一。現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)資料表明，在所有職業(yè)勞動(dòng)的事故中約有30%是直接或間接因光線不足所造成的。
光是指能引起人眼睛光亮感覺(jué)的電磁輻射，當(dāng)光線進(jìn)入眼睛后可產(chǎn)生的知覺(jué)稱為視覺(jué)。人們所見(jiàn)的光是指可見(jiàn)光，其波長(zhǎng)范圍在380～760nm之間。
采光可分為自然采光和人工光源兩大類。自然采光是指室內(nèi)和地區(qū)的天然照度，有直接的日光照散射光和周圍物體的反射光，常用采光系數(shù)和自然照度表示，而采光系數(shù)是指采光口的有效面積與室內(nèi)地面面積之比。
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