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一.相襯鏡檢法(Phasecontrast)
在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過(guò)程中,相襯鏡檢術(shù)的發(fā)明成功,是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的波長(zhǎng)(顏色)和振幅(亮度),對(duì)于無(wú)色通明的生物標(biāo)本,當(dāng)光線通過(guò)時(shí),波長(zhǎng)和振幅變化不大,在明場(chǎng)觀察時(shí)很難觀察到標(biāo)本。相襯顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)像,將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹睿词故菬o(wú)色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見(jiàn)。這大大便利了活體細(xì)胞的觀察,因此相襯鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。
1. 相襯鏡檢法在裝置上與明場(chǎng)不同,有一些特殊要求:
( 1 ) 環(huán)狀光闌(Ringslit):裝在聚光鏡的下方,而與聚光鏡組合為一體——相襯聚光鏡。它是由大小不同的環(huán)形光闌裝在一圓盤(pán)內(nèi),外面標(biāo)有10X、20X、40X、100X等字樣,與相對(duì)應(yīng)倍數(shù)的物鏡配合使用。
( 2 ) 相板(Phase plate):裝在物鏡的后焦平面處,它分為兩部分,一是通過(guò)直射光的部分,為半透明的環(huán)狀,叫共軛面;另一是通過(guò)衍射光的部分,叫“補(bǔ)償面”。有相板的物鏡稱(chēng)“相襯物鏡”,外殼上常有“Ph”字樣。
2. 相襯鏡檢法是一種比較復(fù)雜的鏡檢方法,想要得到好的觀察效果,顯微鏡的調(diào)試非常重要。除此之外還應(yīng)注意以下幾個(gè)方面。
( 1 )光源要強(qiáng),全部開(kāi)啟孔徑光闌;
( 2 ) 使用濾色片,使光波近于單色;
二.微分干涉相襯鏡檢術(shù)(Differential interferencecontrast DIC)
微分干涉相襯鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代,它不僅能觀察無(wú)色透明的物體,而且圖像呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn),觀察效果更為逼真。
1.原理
微分干涉相襯鏡檢術(shù)是利用特制的渥拉斯頓棱鏡來(lái)分解光束。分裂出來(lái)的光束的振動(dòng)方向相互垂直且強(qiáng)度相等,光束分別在距離很近的兩點(diǎn)上通過(guò)被檢物體,在相位上略有差別。由于兩光束的裂距極小,而不出現(xiàn)重影現(xiàn)像,使圖像呈現(xiàn)出立體的三維感覺(jué)。
2.微分干涉相襯鏡檢術(shù)所需的特殊部件:
(1)起偏鏡
(2)檢偏鏡
(3)渥拉斯頓棱鏡2 塊
3.微分干涉鏡檢時(shí)的注意事項(xiàng)
(1)因微分干涉相襯靈敏度高,制片表面不能有污物和灰塵。
(2)具有雙折射性的物質(zhì),不能達(dá)到微分干涉相襯鏡檢的效果。
(3)倒置顯微鏡應(yīng)用微分干涉相襯時(shí),不能用塑料培養(yǎng)皿。