(一) 原理和結構特點
在日常生活中，室內飛揚的微?；覊m是不易被看見的，但在暗的房間中若有一束光線從門縫斜射進來，灰塵便粒粒可見了，這是光學上的丁達爾現象。暗視野顯微鏡就是利用此原理設計的。它的結構特點主要是使用遮光板或暗視野聚光器，常用的是拋物面聚光器，使光源的光束被阻擋．不能由下而上地通過標本進入物鏡。從而使光線改變途徑，傾斜地照射在觀察的標本上，標本遇光發生反射或散射，散射的
光線投入物鏡內，因而整個視野是黑暗的。在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像．并非物體的本身，所以只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細微結構。但被檢物體為非均質時，并大于1／2波長，則各級衍射光線同時進入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構造。
一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細微結構，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細胞的結構和細胞內微粒的運動等。
(二) 制作遮光板
普通顯微鏡只要聚光器是可以拆卸的，支架的口徑適于安裝暗視野聚光器，即可改裝成暗視野顯微鏡。在無暗視野聚光器時，可用厚黑紙片制作一個遮光板，放在普通顯微鏡的聚光器下方的濾光片框上，也能得到暗視野效果。
(1)．將顯微鏡聚光器調到位置，用低倍鏡對好焦距。
(2)．取下目鏡，從鏡筒中觀察并調節光闌的大小，使其與鏡筒中所見物鏡的視野相等。
(3)．用厚黑紙剪制擋光板。外圈直徑與濾光片框架相同，部分的大小與調節好的光闌孔徑一樣(可用半透明的小紙片，放在通光孔處聚光鏡鏡面上，紙上顯示的光斑即為光闌的孔徑，再用圓規量取大小)。
(4)．將擋光板放在濾光片框架上，開大光闌進行樣品觀察。
如需使用高倍鏡作暗視野觀察，應按高倍鏡對焦后的視野大小重新制作擋光板。
保存好各自制作的遮光板，以便在后面的實驗中使用。
（三）使用方法
(1)．把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。
(2)．選用強的光源，但又要防止直射光線進入物鏡，所以一般用顯微鏡燈照明。
(3)．在聚光器和標本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線于聚光鏡上面進行全反射，達不到被檢物體，而得不到暗視野照明。
(4)．升降集光器，將集光鏡的焦點對準被檢物體，即以圓錐光束的頂點照射被檢物。如果聚光器能水平移動并附有中心調節裝置，則應首行中心調節，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴格位于一直線上。
(5)．選用與聚光器相應的物鏡，調節焦距＜操作方法與普通顯微鏡相同＝，找到所需觀察的物像。
（四）觀察
觀察示教臺上暗視野顯微鏡下的活細胞。在黑暗的背景里，可見細胞、細胞核和細胞器的衍射光圖像
