科學(xué)家實現(xiàn)高效植物病原菌定量檢測
快速準(zhǔn)確的病原菌檢測方法是病害監(jiān)測、防治，抗病資源篩選與品種鑒定，抗病基因定位以抗病機(jī)理解析的先決條件。因此，急需開發(fā)一種高靈敏度、高準(zhǔn)確性且能夠快速實時檢測病原菌的技術(shù)。
近日，北京市農(nóng)林蔬菜中心副研究員張春秋與美國密歇根州立大學(xué)教授Rebecca Grumet聯(lián)合在《植物科學(xué)前沿》在線發(fā)表研究論文。研究建立了高通量的實時定量檢測病原菌的方法，該方法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等優(yōu)點，在病原菌侵染后可以迅速檢測到病原菌，并且實時定量監(jiān)測植物活體組織上病原菌的生長變化。
項目團(tuán)隊以寄主范圍廣、危害嚴(yán)重的疫霉病病原菌為研究對象，利用帶有表達(dá)紅色熒光蛋白（RFP）的分離株，通過對樣品前處理方法、病原菌接種的濃度和檢測條件的優(yōu)化，建立了Spark plate reader結(jié)合微量滴定板實時定量檢測活組織中病原體生長的方法。
研究發(fā)現(xiàn)，該方法能高效應(yīng)用于黃瓜果實和辣椒葉片中疫病病原菌的實時定量檢測，具有重復(fù)性和靈敏度高的優(yōu)點，可以同時實現(xiàn)多個樣品的高通量檢測，并且可以在病原菌侵染初期（癥狀出現(xiàn)之前）進(jìn)行監(jiān)測，顯著優(yōu)于傳統(tǒng)的表型鑒定法、酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）等方法，對于植物病害防控與抗病育種具有重要意義。
該方法目前已被多個實驗室采納，證實可以成功應(yīng)用于瓜類作物黃瓜、甜瓜、西葫蘆和茄果類蔬菜作物番茄、馬鈴薯等疫病病原菌侵染過程的實時定量檢測。應(yīng)用該方法監(jiān)測黃瓜在疫病菌侵染過程中的病原菌生長量，結(jié)合在病原菌侵染關(guān)鍵時間點的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析，成功找到了參與黃瓜與疫病病原菌互作過程中關(guān)鍵的基因及調(diào)節(jié)因子。
論文建立的方法不僅為疫病抗病基因定位和抗病機(jī)理研究提供了很好的技術(shù)平臺，同時也為其他病害的實時定量檢測提供了新的思路和策略。
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