介紹了固相萃取裝置系統的主要功能,包括自動化系統。
通常,開始的液體混合物中充滿所謂的吸附劑,形成一個固定相。選擇萃取柱填料的類型是分離過程的關鍵。從流動相提取的分析物將以不同于液體的方式與固定相相互作用。換句話說,分析物對色譜柱中的填充物具有很強的親和力,因此在流動相的其余部分流過色譜柱時,仍留在色譜柱中。然后對分析物進行洗脫,以獲得更高純度的樣品。固定相可以在流動相中保留雜質,使目標化合物流過并在洗脫液中收集。
固相萃?。⊿PE)是一種液相色譜法,用于從溶解或懸浮的液體混合物中分離特定的化合物或分析物。通常,目標分析物與混合物中的其他雜質分離,以便使用所得樣品進行進一步分析或定量研究,例如質譜分析。它能去除干擾蛋白質,但不能去除磷脂,后者干擾下游質譜分析。固相萃?。⊿PE)可以同時去除這兩種雜質,使得質譜分析樣品中相對沒有干擾雜質。
固相萃取裝置是一種需要無限優化的方法。為了搞好并繼續實驗,有助于了解固相萃取的基本成分,從而更容易地設定萃取條件,提高工作效率。
固相吸附劑和流動相溶劑的類型在很大程度上取決于樣品或目標分析物的性質。極性和電荷的主要特征分析物是極性。非極性或陽離子或陰離子決定了合適的固定相。將其與適當的疏水性溶劑結合取決于待分析物是通過還是留在柱中以獲得試劑組。
溶劑強度有助于確定填料在固定相流動分析中的速度。對于較弱的溶劑,通過固定相的過程會較慢,因為分析物與包裝材料的關系會更長,而對于較強的溶劑,過程通常更快,這會破壞分析物與固定相之間的相互作用。
固相萃取常見的幾種類型
1、正相和反相固相萃取裝置
固相萃取儀有多種類型,其中最重要的是正相和反相。正相固相萃取使用極性固定相和非極性流動相,通過親水相互作用介導提取。正相固相萃取通常用于分離不帶電荷的分析物,分析物可以是從疏水到極性的任何地方。大多數固定相由二氧化硅組成,二氧化硅已經與特定官能團鍵合以賦予填料材料所需的特性,例如極性程度或疏水性。
反相固相萃取儀是相反的,分析物使用極性流動相通過非極性固定相,萃取由疏水相互作用介導。反相固相萃取通常用于極性非極性的分析物。通常用于反相固相萃取固定相的材料包括具有結合的烷基或芳基的二氧化硅,聚合物涂覆的二氧化硅,基于聚合物的材料。
2 離子交換固相萃取裝置
離子交換固相萃取,提取是通過固相和目標分析物上的帶電化學基團之間的靜電相互作用來介導的。它通常用于根據電荷分離大蛋白質,氨基酸或核苷酸。蛋白質可以具有各種帶正電荷或帶負電荷的基團,這是它們從固定相中分離和洗脫的基礎。這通過使用用于固定相的離子交換填充材料和具有適于與目標分析物相互作用的離子濃度的流動相來實現。逐漸增加流動相中其他離子的pH或濃度將選擇性地洗脫分析物。
使用的離子交換類型部分取決于分析物和離子交換劑的組成。在其表面上具有硫酸部分的強陽離子交換劑總是用負電荷電離,而帶有羧酸基團的較弱陽離子交換劑在較高pH下電離,但在較低pH下電離。相反的情況適用于強和弱陰離子交換劑。
3 混合模式
固相萃取的組合方法稱為混合模式離子交換色譜,離子交換和反相固相萃取裝置。它適用于可能含有中性,酸性和堿性物質的復雜混合物,這些物質可通過疏水相互作用保留在色譜柱上。