傳統電泳儀性能特點歸納
電泳是電解質中的帶電粒子在電場作用下以不同速度向相反方向遷移的現象。利用電泳現象分離化學成分和生化成分的儀器稱為電泳儀。自1930年代和1940年代以來,相繼開發了多種基于抗對流載體的電泳裝置。由于焦耳熱的限制,傳統的電泳儀只能在低電場強度下進行電泳,分離時間長,分離效率低。
傳統的電泳根據有無載體可分為無載體電泳和載體電泳。無載體電泳是在液體介質中進行自由界面電泳的電泳。載體電泳是在固體介質中進行的電泳。載體的主要作用是防止電泳過程中的對流和擴散,使分離的物體能夠以*高分辨率分離。有紙電泳、醋酸纖維素薄膜電泳、聚丙烯酰胺縮合。凝膠電泳、SDS-PAGE電泳、瓊脂糖凝膠電泳、等電聚焦電泳和等速電泳等。
1、自由界面電泳:
1、原理:根據試樣各組分移動速度的不同,溶液在U型管中分離。
2、特點:無載體,對流嚴重,元件不能分離,元件相互重疊,檢測困難。
3、應用:目前很少使用。
2.紙電泳:
1.載體:濾紙。
2、原理:由于載體孔徑大,不存在分子篩效應,分離主要依靠樣品各組分的質荷比差異。
3、特點:濾紙結構松散,孔徑大,導致電泳慢,時間長,樣品擴散嚴重,分辨率低。
4、應用:多用于核苷酸的分離。
3、醋酸纖維素薄膜電泳:
1、載體:醋酸纖維素薄膜。
2、原理:由于載體孔徑大,不存在分子篩效應,分離主要依靠樣品各組分的質荷比差異。
3、與紙電泳相比的優點:電滲效果小,化學惰性好,可以*大限度地減少對流。
4、應用:適用于蛋白質和同工酶的分離分析,特別適用于病理狀態下微量異常蛋白質的檢測。
四。聚丙烯酰胺凝膠電泳:
1.載體:聚丙烯酰胺凝膠。
2、原理:質荷比和分子篩效應。
3、特點:機械強度好,透明有彈性,化學性質穩定,不吸附,幾乎不發生電滲,可制成不同孔徑大小的凝膠,分辨率高。
4、應用:用于蛋白質和較小核酸分子的分離。
5. SDS-PAGE電泳:
1.載體:聚丙烯酰胺凝膠。
2、原理:分子篩效應。
3、特點:樣品無需純化,操作簡單快捷,重復性高。
4、應用:測定蛋白質亞基相對分子量的*佳方法。
六。瓊脂糖凝膠電泳:
1.載體:瓊脂糖凝膠。
2、原理:分子篩效應。
3、特點:凝膠孔徑大,對樣品的吸附極小,分辨率高,重復性好。
4、應用:用于核酸分離。
7、等電聚焦電泳:
1、載體:聚丙烯酰胺凝膠等。
2、原理:利用蛋白質分子或其他兩親分子等電點的差異,在穩定、連續、線性的pH梯度下進行分離。
3.特點:分辨率高,清晰窄帶,分辨率至少可達0.01 pH單位。
4、應用:分離對象限于蛋白質等兩親性分子,常用于同工酶的分離分析和pI的測定。
8. 等速電泳:
1、載體:聚丙烯酰胺凝膠等。
2、原理:使用遷移率大于樣品中任何成分的電解質作為前導電解質,使用遷移率小于樣品中任何成分的電解質作為尾隨電解質。在前導電解質和尾隨電解質之間,根據它們各自遷移率的差異進行分離。
3、特點:區域界面明顯,富集濃縮效果。
4、應用:目前應用不多。