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熒光分光光度計(jì)測(cè)試注意事項(xiàng)
熒光分光光度計(jì)是一種用于掃描液相熒光標(biāo)記發(fā)出的熒光光譜的儀器。它可以提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等多種物理參數(shù),從各個(gè)角度反映分子的鍵合和結(jié)構(gòu)。應(yīng)用于科研、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保、臨床檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域。
熒光強(qiáng)度容易受到外界因素的影響,如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質(zhì)、其他溶質(zhì)、表面活性劑等,都會(huì)引起熒光強(qiáng)度的變化。嚴(yán)格控制測(cè)試條件對(duì)于熒光分析至關(guān)重要。
分光光度計(jì)測(cè)試注意事項(xiàng):
①樣品應(yīng)置于四面透光的石英比色皿(熒光池)中。如果是揮發(fā)性樣品,應(yīng)使用帶塞子的熒光池。
②在熒光分析中,為了獲得穩(wěn)定可靠的數(shù)據(jù),一般需要預(yù)熱氙燈30分鐘左右。如果儀器的光源是閃爍的氙燈,預(yù)熱時(shí)間可以縮短到10分鐘左右。對(duì)于一些易對(duì)光敏感、易分解的熒光物質(zhì),盡量使用波長(zhǎng)長(zhǎng)、光強(qiáng)低、短時(shí)照明。
③溫度變化會(huì)引起熒光強(qiáng)度的變化。一般來(lái)說(shuō),降低溫度有利于提高熒光量子產(chǎn)率,增加熒光強(qiáng)度。影響熒光強(qiáng)度的顯著溫度程度因樣品而異。大多數(shù)熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度受溫度影響不大,測(cè)試溫度的變化不超過(guò)±3℃,對(duì)測(cè)試結(jié)果幾乎沒(méi)有影響。
④當(dāng)熒光物質(zhì)為弱酸或弱堿時(shí),溶液的pH值對(duì)熒光強(qiáng)度的影響很大。由于弱酸或弱堿處于不同的酸度,分子和離子的電離平衡會(huì)發(fā)生變化,熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度會(huì)因其解離狀態(tài)而發(fā)生變化。
⑤分子結(jié)構(gòu)中π-π共軛熒光物質(zhì)的熒光效率在極性溶劑中顯著增強(qiáng)。在溶液中加入表面活性劑可以顯著增加熒光強(qiáng)度。
⑥ 測(cè)試過(guò)程中注意不要用肉眼直視氙氣光源,以防對(duì)眼睛造成傷害。
⑦儀器室要注意經(jīng)常通風(fēng),避免室內(nèi)產(chǎn)生的臭氧堆積。