| 核酸蛋白質檢測方法 |
一)蛋白質的鹽析 取1.5mL蛋白質溶液，加入等體積飽和硫酸銨溶液(濃度為50%飽和)，微微搖動試管，使溶液混合均勻后，靜置數分鐘，球蛋白即析出呈絮狀沉淀(如無沉淀可再加少許飽和硫酸銨)，用濾紙濾取上清液，濾液中再加入固體硫酸銨粉末至不再溶解，析出的即為清蛋白，再加水稀釋，觀察沉淀是否溶解。 (二)蛋白質的沉淀 1．用重金屬鹽沉淀蛋白質 取三支試管，各加1mL蛋白質溶液，分別各加3滴6%醋酸鉛溶液、3滴2%硫酸銅溶液和3滴1%溶液，觀察蛋白質沉淀的析出。 2．用有機酸沉淀蛋白質 取二支試管，各加1mL蛋白質溶液，并加5%醋酸溶液使之呈酸性(該沉淀反應*好在弱酸中進行)。然后分別滴加飽和、飽鞣酸溶液，直至沉淀產生為止。 用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液進行類似實驗(用量同前)，觀察現象。 (三)蛋白質的顏色反應 1．黃蛋白反應 于試管中，加1mL蛋白質溶液和10滴濃硝酸溶液，直火加熱煮沸，觀察溶液和沉淀顏色。冷卻后，再加入20滴10%氫氯化鈉溶液，觀察顏色變化。 2．與茚三酮的反應 在二支試管中，分別加1%賴氨酸溶液和1mL蛋白質溶液，分別加2滴茚三酮溶液，加熱至沸，觀察有什么現象？ 3．與試劑作用——米倫反應 在二支試管中，分別加1mL 0.5%溶液和1mL蛋白質溶液，再各加0.5mL米倫試劑(不可太多)，溶液出現玫瑰紅色，而蛋白質溶液加熱后出現沉淀，加熱凝固的蛋白質呈磚紅色，有時溶液也呈紅色。 4．蛋白質的雙縮脲反應 (1) 雙縮脲的生成 于干燥試管中，加0.2g～0.3g尿素，微火加熱，尿素熔化并形成雙縮脲，放出的氨可用紅色石蕊試紙試驗。試管內有白色固體出現后，停止加熱。 (2) 雙縮脲反應 上述產物冷卻后，加1mL10%*溶液，搖勻，再加2滴2%硫酸酮溶液，混勻，觀察有無紫色出現。 于試管中，加1mL清蛋白溶液和1mL10%氫氧化銅溶液，再加1滴～2滴2%硫酸銅溶液共熱，由于蛋白質與硫酸銅生成絡合物而呈紫色。取1%賴氨酸溶液作對照，觀察顏色變化。 (四) 核蛋白組成的鑒定 1．核蛋白的水解 取20mL酵母核蛋白混懸液于離心管中離心分離，棄去清液，將沉淀轉入小燒杯中，加15mL 5%硫酸，蓋上表面皿在水浴上煮沸約1h(煮沸過程中保持原有體積)，水解畢，離心分離，取上層清液作以下檢查。 2．核糖的鑒定 于試管中，加1mL 20%鹽酸溶液，以小火加熱至沸，迅速加入5滴水解液，呈現紅色，(如紅色不顯可再稍加熱)。 3．磷酸的鑒定 取10滴水解液，置于試管中，加5滴7%鉬酸銨溶液和2滴濃硝酸溶液，小心于火上加熱，即有黃色沉淀生成。 4．嘌呤與嘧啶的鑒定 取約4mL水解液，置于小燒杯中，加入氨水至微堿性，過濾，在濾液中加1mL 5%銨溶液，靜置片刻，即有絮狀的嘌呤或嘧啶銀鹽沉淀生成。 |
