解析PCR反應(yīng)中的主要成份模板:
1、PCR反應(yīng)必須以DNA為模板進(jìn)行擴(kuò)增, 模板DNA可以是單鏈分子,也可以是雙鏈分子,可以是線(xiàn)狀分子,也可以是環(huán)狀分子(線(xiàn)狀分子比環(huán)狀分子的擴(kuò)增效果稍好)。
2、就模板DNA而言,影響PCR的主要因素是模板的數(shù)量和純度.一般反應(yīng)中的模板數(shù)量為102 -105 個(gè)拷貝,對(duì)于單拷貝基因,這需要0.1μg的人基因組DNA,10ng的酵母DNA,1ng的大腸桿菌DNA.擴(kuò)增多拷貝序列時(shí),用量更少。
3、靈敏的PCR可從一個(gè)細(xì)胞,一根頭發(fā),一個(gè)孢子或一個(gè)精子提取的DNA中分析目的序列。
4、模板量過(guò)多則可能增加非特異性產(chǎn)物。DNA中的雜質(zhì)也會(huì)影響PCR的效率。
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